PH0219 | 粪便基因组DNA提取试剂盒 Stool Genomic DNA Extraction Kit

产品简介

本试剂盒适合于从各种粪便中提取微生物 DNA。试剂盒中含有对粪便中各种细菌、真菌有很好裂解效果，最大限度的保留了微生物 DNA 的多态性。使用本试剂盒提取的 DNA 产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交等实验。

试剂组分

试剂组分 50T 100T 存储
RNase A 100uL 2×100uL -20℃
蛋白酶 K 1mL 2×1mL -20℃
试剂A：保存液 50mL 100mL RT
试剂B：裂解液 40mL 80mL RT
试剂C：缓冲液 40mL 80mL RT
漂洗液I 18mL 2×18mL RT
漂洗液II 8mL 2×8mL RT
洗脱液 5mL 10mL RT
DNA吸附柱 50个 100个 RT

注意：使用前请先在漂洗液 I、II 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。需自备无水乙醇(以 50T 为例，漂洗液 I 加 12mL 无水乙醇，漂洗液 II 加 24mL 无水乙醇)

操作步骤：

1. 称取 200mg 粪便于 2mL 离心管，加入 1mL 试剂 A，颠倒混匀；


2. 70℃水浴 20min，期间颠倒混匀数次，12000rpm 离心 5min，弃上清；


3. 沉淀中加入 800μL 试剂 B 重悬，加入 2μL RNase A，颠倒混匀后室温放置 15min；接着加入 20μL蛋白酶 K，颠倒混匀后 65℃水浴 30min，期间颠倒混匀数次，12000rpm 离心 2min；


4. 转移上清于新的 2mL 离心管，加入 800μL 试剂 C，颠倒混匀；
注：若上清表面有悬浮物时尽量不要吸到。
5. 将混合液转移至 DNA 吸附柱中（吸附柱放于收集管），静置 2min 后 12000rpm 离心 1min；
注：吸附柱一次最多可加 800μL 液体；若混合液多于 800μL，则分两次加入吸附柱。


6. 倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管后加入 600μL 漂洗液 I，12000rpm 离心 1min；


7. 倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管后加入 600μL 漂洗液 II，12000rpm 离心 1min；


8. 倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中，12000rpm 离心 1min；


9. 拿出吸附柱在室温干燥 2min；


10. 将吸附柱放入一个新的离心管中，加入 50-100μL 洗脱液，室温静置 5min，12000rpm 离心 1min。离心管中即为粪便微生物 DNA 溶液。


注意事项：
1. 新鲜的粪便样本会得到更高的产率，不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。
2. 在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。
3. 洗脱缓冲液的体积最好不少于 50μL，体积过小会影响回收效率；建议使用试剂盒附带的洗脱缓冲液，用水洗脱也会损失部分产物；DNA 应保存在-20 ℃避免反复冻融，以防降解。
4. 液体试剂避免接触皮肤，若意外接触应立即使用大量清水冲洗。